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蛋白質(zhì)提純的注意事項(xiàng)和常見(jiàn)問(wèn)題有什么？

在進(jìn)行任何一種蛋白質(zhì)純化的時(shí)候，都要時(shí)刻注意維護(hù)它的穩(wěn)定性，保護(hù)它的活性，那么你知道蛋白質(zhì)提純的注意事項(xiàng)和常見(jiàn)問(wèn)題有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、注意事項(xiàng)：1、操作盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行。2、濃度不要太稀，蛋白濃度維持在μg/mL～mg/mL。3、選擇合適的pH，除非是進(jìn)行聚焦層析，所使用的緩沖溶液pH避免與pI相同，防止蛋白質(zhì)的沉淀。4、使用蛋白酶抑制劑，防止蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的降解；在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時(shí)，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA對(duì)蛋白的污染。5、避免...

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你知道WB實(shí)驗(yàn)操作步驟有哪幾步嗎？

蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)：又稱(chēng)為免疫印跡，根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合，半定量檢測(cè)樣品中的某種蛋白的方法。基本原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過(guò)分析條帶的位置和條帶深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況。那么你知道WB實(shí)驗(yàn)操作步驟有哪幾步嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、樣本制備蛋白提取1.前期準(zhǔn)備：首先要了解你所研究蛋白的內(nèi)源表達(dá)水平，常用的數(shù)據(jù)庫(kù)如Uniport、Atlas、BioGPS，或查閱相關(guān)文獻(xiàn)。設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照...

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細(xì)胞培養(yǎng)基的滅菌及儲(chǔ)存方法有哪些？

不同的培養(yǎng)基由于其營(yíng)養(yǎng)成份不同，滅菌方式和儲(chǔ)存方法也可能不同。那么細(xì)胞培養(yǎng)基的滅菌及儲(chǔ)存方法有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、不同細(xì)胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項(xiàng)某些培養(yǎng)基（如MEM）可進(jìn)行高壓滅菌，這類(lèi)培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養(yǎng)基高壓滅菌后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺?？筛邏簻缇呐囵B(yǎng)基在121℃、15psi，15分鐘的條件下wan全可達(dá)到滅菌效果及營(yíng)養(yǎng)成分的最小損失，不需將滅菌時(shí)間延長(zhǎng)。絕大多數(shù)細(xì)胞...

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細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)有什么？

動(dòng)物細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中不僅能存活，還要分裂增殖，合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。那么細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)有什么呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、pH動(dòng)物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件，適宜pH在7.2～7.4之間。細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計(jì)來(lái)測(cè)定。在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng)，二氧化碳不斷被釋放，培養(yǎng)液變酸，pH值發(fā)生變化。酚紅是細(xì)胞培養(yǎng)基中常用的pH指示劑，但依靠細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進(jìn)行判斷，需要實(shí)驗(yàn)員的經(jīng)驗(yàn)...

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細(xì)胞的處理與采集方法是什么？

采集方法和處理是獲取細(xì)胞來(lái)源后的關(guān)鍵步驟，它們直接影響到細(xì)胞的質(zhì)量和活力。那么你知道細(xì)胞的處理與采集方法是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、采集方法：1.骨髓穿刺：通過(guò)骨髓穿刺針將針頭插入骨髓腔，通常在骨盆骨骼或胸骨等部位進(jìn)行。這種方法適用于骨髓來(lái)源的細(xì)胞，如造血干細(xì)胞。2.外周血采集：通過(guò)外周靜脈或動(dòng)脈采集患者的整個(gè)血液。這種方法適用于外周血來(lái)源的細(xì)胞，如外周血造血干細(xì)胞。3.脂肪抽?。和ㄟ^(guò)脂肪組織的吸取來(lái)獲取脂肪來(lái)源的細(xì)胞，如脂肪干細(xì)胞。這種方法通常使用吸脂器來(lái)抽取脂肪組織...

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